做标准曲线需要注意的问题

目前国际上最流行的免疫检测拟合方式是“四参数逻辑拟合"，用这种拟合方式往往能够比较的反映浓度和吸光度的曲线关系，从而进一步比较正确的获得样品中待测物质的浓度值。

   其实，在一个长的区间内，Logistic应该都能拟合得较为理想。但并不是说它就是的。事实上不仅是ELISA，其它很多生物学反应都是S形曲 线，也都可以用Logistic曲线拟合。但建模型是一回事，而用它来定量是另一回事。如果用来定量，S形曲线的中间段（较陡处）是比较好的，而两端的平 坦部分计算误差会大，有时甚至会很大。

做标准曲线需要注意：

1、样品的浓度等指标是根据标准曲线计算出来的，所以首先要把做标准曲线看作是比做正式实验还要重要的一件事，否则后面的实验结果无从谈起。

2、设置标准曲线样品的标准浓度范围要有一个比较大的跨度，并且要能涵盖你所要检测实验样品的浓度，即样品的浓度要在标准曲线浓度范围之内，包括上限和下限。而对于呈S型的标准曲线，尽量要使实验样品的浓度在中间坡度zui陡段，即曲线几乎成直线的范围内。

3、最好采用倍比稀释法配制标准曲线中的标准样品浓度，这样就能够保证标准样品的浓度不会出现较大的偏离。

4、检测标准样品时，应按浓度递增顺序进行，以减少高浓度对低浓度的影响，提高准确性。

5、标准曲线的样品数一般为7个点，但至少要保证有5个点。

6、做出的标准曲线相关系数因实验要求不同而有所变动，但一般来说，相关系数R至少要大于0.98，对于有些实验，至少要0.99甚至是0.999。